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什么是LightCycler 480 II 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

發(fā)布時(shí)間:2025/2/6點(diǎn)擊次數(shù):84

LightCycler 480 II 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Roche Diagnostics)

一、設(shè)備概述

LightCycler 480 II 是 Roche Diagnostics 研發(fā)的一款高通量、全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)儀器。該設(shè)備采用創(chuàng)新的熱循環(huán)技術(shù),結(jié)合先進(jìn)的熒光檢測(cè)系統(tǒng),能夠顯著提高實(shí)驗(yàn)效率,同時(shí)確保高精度和高重復(fù)性的檢測(cè)結(jié)果。LightCycler 480 II 適用于基因表達(dá)分析、基因分型、突變檢測(cè)、病原體檢測(cè)等多種應(yīng)用,特別適合需要高精度定量和大規(guī)模實(shí)驗(yàn)的研究需求。


二、主要特點(diǎn)

1. 高通量支持

LightCycler 480 II 支持 96 孔板384 孔板兩種格式,滿足不同實(shí)驗(yàn)通量的需求。高通量能力使其特別適用于大規(guī)模基因篩選和臨床樣本檢測(cè)。

2. 創(chuàng)新的熱循環(huán)技術(shù)

該設(shè)備采用高效的銀合金模塊,確保熱傳遞的均勻性和快速升降溫能力。溫度均勻性對(duì)于PCR反應(yīng)的準(zhǔn)確性至關(guān)重要,LightCycler 480 II 通過優(yōu)化熱循環(huán)系統(tǒng),確保實(shí)驗(yàn)的高精度和重復(fù)性。

3. 多通道熒光檢測(cè)

LightCycler 480 II 具備 5 個(gè)熒光檢測(cè)通道,能夠同時(shí)檢測(cè)多種熒光染料,包括 SYBR Green、TaqMan 探針等。其靈敏的光學(xué)系統(tǒng)能夠高效檢測(cè)熒光信號(hào),使得多重PCR(Multiplex PCR)成為可能,大幅提高實(shí)驗(yàn)效率。

4. 精確的定量分析

LightCycler 480 II 能夠進(jìn)行絕對(duì)定量、相對(duì)定量、基因分型、溶解曲線分析等實(shí)驗(yàn),適用于多種研究領(lǐng)域。其強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析軟件支持標(biāo)準(zhǔn)曲線法、ΔΔCt 法等不同定量分析方法,確保數(shù)據(jù)的可靠性。

5. 直觀的軟件界面

配套的 LightCycler 軟件提供直觀的操作界面,可實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)采集、擴(kuò)增曲線分析、基因分型等功能。該軟件還能自動(dòng)生成實(shí)驗(yàn)報(bào)告,簡(jiǎn)化數(shù)據(jù)管理流程。

6. 適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)需求

LightCycler 480 II 兼容多種熒光探針、染料和 PCR 反應(yīng)體系,能夠靈活適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)需求,如:

  • 基因表達(dá)分析

  • 基因分型

  • 突變檢測(cè)

  • 病原體檢測(cè)

  • 藥物篩選


三、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 基因表達(dá)分析

LightCycler 480 II 通過實(shí)時(shí)熒光檢測(cè),精準(zhǔn)量化基因表達(dá)水平,適用于研究細(xì)胞信號(hào)通路、疾病機(jī)制及藥物作用。

2. 基因分型

該設(shè)備可用于 SNP(單核苷酸多態(tài)性)檢測(cè)和等位基因分型,廣泛應(yīng)用于遺傳學(xué)研究和個(gè)性化醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。

3. 突變檢測(cè)

可用于檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因突變、病毒變異株等。高靈敏度的熒光檢測(cè)系統(tǒng)確保微量突變的準(zhǔn)確識(shí)別。

4. 病原體檢測(cè)

LightCycler 480 II 可用于檢測(cè)病毒、細(xì)菌和其他病原微生物,特別適用于臨床診斷和公共衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。

5. 藥物篩選

可用于篩選影響基因表達(dá)的候選藥物,評(píng)估藥物的作用機(jī)制。


四、操作流程

  1. 樣本準(zhǔn)備

    • 提取 DNA/RNA

    • 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄(如 RNA 需要轉(zhuǎn)錄為 cDNA)

  2. PCR 反應(yīng)體系配置

    • 添加 PCR 反應(yīng)緩沖液、熒光探針/染料、酶、引物等

    • 配置標(biāo)準(zhǔn)曲線(如需要)

  3. 裝載樣本

    • 使用 96 孔或 384 孔 PCR 板

    • 進(jìn)行密封,防止蒸發(fā)

  4. 設(shè)置 PCR 程序

    • 配置擴(kuò)增步驟,如變性、退火、延伸等

    • 選擇檢測(cè)通道和數(shù)據(jù)采集模式

  5. 運(yùn)行 PCR 反應(yīng)

    • 啟動(dòng) LightCycler 480 II

    • 實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào),記錄擴(kuò)增曲線

  6. 數(shù)據(jù)分析

    • 生成擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線、Ct 值分析等

    • 輸出實(shí)驗(yàn)報(bào)告


五、維護(hù)與保養(yǎng)

為了保持 LightCycler 480 II 的最佳性能,建議定期進(jìn)行以下維護(hù):

  1. 清潔光學(xué)組件

    • 使用適當(dāng)?shù)那鍧嵢軇┎潦脵z測(cè)模塊,避免灰塵影響熒光檢測(cè)。

  2. 溫控系統(tǒng)校準(zhǔn)

    • 定期進(jìn)行溫度均一性測(cè)試,確保加熱模塊工作正常。

  3. 軟件升級(jí)

    • 確保 LightCycler 軟件版本最新,以獲得最新的數(shù)據(jù)分析功能。

  4. 日常檢查

    • 運(yùn)行空白實(shí)驗(yàn),確保儀器沒有背景熒光污染。


六、技術(shù)參數(shù)一覽

參數(shù)規(guī)格
適用板型96 孔、384 孔
熒光檢測(cè)通道5 個(gè)通道
兼容熒光染料SYBR Green、TaqMan 探針、FAM、HEX、ROX、Cy5
溫度均勻性± 0.1°C
反應(yīng)體積10 - 100 µL(96 孔);5 - 20 µL(384 孔)
數(shù)據(jù)分析絕對(duì)定量、相對(duì)定量、基因分型、溶解曲線
軟件LightCycler 軟件
通量高通量支持

七、總結(jié)

LightCycler 480 II 是一款高通量、高精度的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀器,特別適用于需要進(jìn)行大規(guī)模樣本分析的實(shí)驗(yàn)室。其先進(jìn)的熱循環(huán)技術(shù)、靈敏的熒光檢測(cè)系統(tǒng)和直觀的軟件操作界面,使其成為分子生物學(xué)研究、臨床診斷和藥物篩選等領(lǐng)域的重要工具。無(wú)論是基因表達(dá)分析、基因分型,還是病原體檢測(cè),LightCycler 480 II 都能提供可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,為科學(xué)研究和醫(yī)療應(yīng)用提供有力支持

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