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賽默飛7500型實時熒光定量PCR儀(Applied Biosystems 7500)介紹

發(fā)布時間:2025/2/6點擊次數(shù):120

賽默飛7500型實時熒光定量PCR儀(Applied Biosystems 7500)介紹

一、概述

賽默飛(Thermo Fisher Scientific)旗下的Applied Biosystems 7500型實時熒光定量PCR儀(7500 Real-Time PCR System)是一款高性能的實時熒光定量PCR(qPCR)儀器。它被廣泛應用于基因表達分析、病原檢測、突變檢測、基因拷貝數(shù)分析等多個分子生物學研究和臨床檢測領域。7500型PCR儀結(jié)合精確的光學檢測系統(tǒng)、智能化數(shù)據(jù)分析軟件和穩(wěn)定的溫控系統(tǒng),可提供高靈敏度和高通量的qPCR檢測,滿足科研、醫(yī)療及工業(yè)實驗室的需求。


二、主要特點

7500型實時熒光定量PCR儀在光學系統(tǒng)、檢測通道、數(shù)據(jù)分析等方面具有明顯的優(yōu)勢,適用于各種PCR實驗。

1. 高精度光學檢測系統(tǒng)

  • 優(yōu)化的光學設計,能夠準確采集熒光信號,提高檢測靈敏度。

  • 支持多種熒光檢測方式,兼容SYBR Green染料和TaqMan探針技術(shù)。

  • 快速數(shù)據(jù)采集,提高擴增曲線的準確性,確保數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。

2. 靈活的熒光檢測通道

  • 支持5個熒光通道,能夠進行多重PCR實驗,檢測多個目標基因。

  • 兼容多種熒光染料(FAM™、VIC®、ROX™、SYBR® Green等),適用于不同類型的實驗。

3. 精確的溫控系統(tǒng)

  • 高效的Peltier熱循環(huán)系統(tǒng),確保樣品孔間溫度均一性,提高擴增的重復性和可靠性。

  • 快速升降溫,縮短實驗時間,提高工作效率。

4. 強大的數(shù)據(jù)分析軟件

  • Applied Biosystems專用軟件,支持標準曲線分析、相對定量分析(2-ΔΔCt方法)、絕對定量分析等數(shù)據(jù)處理功能。

  • 直觀的用戶界面,可自動計算Ct值、熔解曲線分析,支持導出實驗報告。

5. 兼容多種樣本板型

  • 支持96孔板,適用于中等通量實驗需求。

  • 兼容各種PCR反應體系,包括TaqMan探針法、SYBR Green熒光染料法。

6. 可靠的實驗重復性

  • 通過優(yōu)化的檢測和溫控系統(tǒng),保證數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性重復性,適用于科研實驗、臨床診斷、環(huán)境檢測等領域。


三、技術(shù)規(guī)格

參數(shù)詳細信息
熒光通道5個(支持多重PCR)
檢測模式SYBR Green、TaqMan探針
PCR反應板96孔板
溫控精度±0.25°C
熒光檢測范圍FAM™, VIC®, ROX™, NED™, TAMRA™
數(shù)據(jù)分析絕對定量、相對定量、基因分型、熔解曲線分析
軟件支持Applied Biosystems 7500 Software
升降溫速率3.5°C/s

四、適用領域

1. 基因表達分析

  • 通過實時PCR檢測特定基因的表達水平,適用于生物醫(yī)學研究、藥物研發(fā)等領域。

  • 可使用SYBR Green染料法或TaqMan探針法進行高靈敏度的基因表達定量分析。

2. 病原體檢測

  • 7500型PCR儀可檢測細菌、病毒(如SARS-CoV-2、流感病毒、HIV等),適用于傳染病檢測。

  • 高靈敏度檢測可確保低拷貝病原DNA/RNA的可靠檢測。

3. 突變檢測與基因分型

  • 適用于SNP(單核苷酸多態(tài)性)分析、點突變檢測、腫瘤基因突變研究等。

  • 結(jié)合TaqMan探針技術(shù),可實現(xiàn)高特異性的基因分型分析。

4. 司法鑒定與食品安全

  • 適用于DNA指紋鑒定、食品安全檢測(如轉(zhuǎn)基因食品檢測)。

  • 通過實時PCR技術(shù),可快速鑒定樣本來源,提高實驗效率。


五、操作流程

7500型PCR儀的使用流程如下:

1. 樣品準備

  • 提取DNA或RNA,進行濃度測定和純化。

  • 選擇合適的PCR反應體系(SYBR Green或TaqMan探針)。

  • 配制PCR反應液,包括引物、探針、dNTPs、PCR緩沖液、熒光染料或探針

2. 加樣與PCR板準備

  • 將PCR反應體系分裝至96孔PCR板,每孔體積通常為10-50 µL。

  • 使用封膜密封PCR板,避免交叉污染。

3. 運行PCR程序

  • 在7500 PCR儀的軟件中創(chuàng)建實驗:

    • 設定PCR反應條件(變性、退火、延伸)。

    • 選擇熒光通道并設置數(shù)據(jù)采集模式。

  • 啟動PCR實驗,實時監(jiān)測熒光信號變化。

4. 數(shù)據(jù)分析

  • 通過儀器自帶的軟件分析Ct值,計算基因表達水平或DNA拷貝數(shù)。

  • 生成擴增曲線、標準曲線,進行數(shù)據(jù)比對。


六、數(shù)據(jù)分析

1. Ct值計算

  • **Ct(閾值循環(huán)數(shù))**表示PCR擴增產(chǎn)物的檢測閾值,Ct值越低,表示初始DNA/RNA濃度越高。

  • 用于基因表達分析、病原體檢測等實驗。

2. 絕對定量分析

  • 通過標準曲線計算DNA/RNA拷貝數(shù),適用于病毒載量檢測等研究。

3. 相對定量分析(ΔΔCt法)

  • 比較實驗組和對照組基因表達水平,廣泛應用于藥物研究、癌癥生物標志物分析。


七、實驗注意事項

  • 確保樣品純度:DNA/RNA質(zhì)量影響擴增效率,應避免蛋白或其他雜質(zhì)污染。

  • 正確設置熒光通道:不同的熒光探針需要匹配相應的檢測通道。

  • 避免交叉污染:使用無RNA/DNA酶的移液器和試劑,嚴格遵循無菌操作流程。

  • 優(yōu)化引物設計:避免二聚體形成,提高PCR特異性和擴增效率。


八、總結(jié)

賽默飛7500型實時熒光定量PCR儀憑借高靈敏度的熒光檢測、精準的溫控系統(tǒng)、強大的數(shù)據(jù)分析功能,已成為基因組研究、病原檢測、臨床診斷等領域的常見PCR設備。其多通道檢測、兼容多種熒光探針、支持高通量檢測的特點,使其適用于從基礎研究到應用檢測的各種實驗需求。通過合理優(yōu)化實驗條件,7500型PCR儀能夠提供高精度、穩(wěn)定可靠的PCR定量分析結(jié)果,為科研人員和臨床醫(yī)生提供強有力的實驗支持。


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