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什么是羅氏Roche實時熒光量PCR儀

更新時間:2025-06-10點擊次數(shù):21

羅氏Roche實時熒光定量PCR儀是一種用于核酸定量的分子生物學儀器,基于聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù),結(jié)合熒光信號檢測系統(tǒng),實現(xiàn)對目標DNA或RNA的實時監(jiān)測和定量分析。該儀器廣泛應(yīng)用于醫(yī)學診斷、病原體檢測、基因表達分析、轉(zhuǎn)基因檢測等領(lǐng)域,具有高靈敏度和特異性,能夠快速、準確地提供實驗結(jié)果。

一、基本原理

實時熒光定量PCR技術(shù)通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標記的探針或染料,利用熒光信號的積累與擴增產(chǎn)物的數(shù)量成正比的關(guān)系,實時監(jiān)測擴增過程。羅氏Roche實時熒光定量PCR儀采用光學檢測系統(tǒng),在每一輪擴增循環(huán)中采集熒光信號,通過軟件分析生成擴增曲線,從而計算出初始模板的濃度。

二、儀器特點

  1. 多通道檢測:支持多種熒光染料同時檢測,可進行多重PCR分析,提高實驗效率。

  2. 溫控系統(tǒng):采用精確的溫控模塊,確保PCR反應(yīng)在不同溫度階段(變性、退火、延伸)的穩(wěn)定性和均一性。

  3. 數(shù)據(jù)處理軟件:配備專用分析軟件,可自動生成標準曲線、計算Ct值(閾值循環(huán)數(shù)),并提供多種數(shù)據(jù)分析模式。

  4. 模塊化設(shè)計:部分型號支持多模塊并行運行,適合高通量實驗需求。

  5. 兼容性:適配多種熒光探針(如TaqMan、SYBR Green等)和不同規(guī)格的反應(yīng)管或板。

三、應(yīng)用領(lǐng)域

  1. 臨床診斷:用于病毒載量檢測(如HIV、HBV、HCV)、細菌或真菌感染診斷、遺傳病篩查等。

  2. 科研實驗:研究基因表達差異、單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析、microRNA定量等。

  3. 食品安全與環(huán)境監(jiān)測:檢測食品中的轉(zhuǎn)基因成分或病原微生物,以及環(huán)境樣本中的特定DNA序列。

  4. 藥物開發(fā):在藥物靶點驗證和療效評估中用于基因表達水平的分析。

四、操作流程

  1. 樣本制備:提取待測樣本的DNA或RNA,并進行純度與濃度檢測。

  2. 反應(yīng)體系配置:將模板核酸、引物、探針、酶和緩沖液按比例混合。

  3. 程序設(shè)置:根據(jù)實驗需求設(shè)定擴增程序(循環(huán)次數(shù)、溫度參數(shù)等)。

  4. 上機運行:將反應(yīng)管或板放入儀器,啟動程序并實時監(jiān)測熒光信號。

  5. 數(shù)據(jù)分析:通過軟件自動或手動分析擴增曲線,計算目標序列的初始拷貝數(shù)。

五、注意事項

  1. 防污染措施:實驗區(qū)域需分區(qū)(試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)),避免氣溶膠污染。

  2. 質(zhì)量控制:包括陰性對照(無模板對照)和陽性對照,確保結(jié)果可靠性。

  3. 校準維護:定期進行光學校準和溫度驗證,保證儀器性能穩(wěn)定。

六、常見型號

羅氏Roche實時熒光定量PCR儀包括LightCycler系列(如LightCycler 480、LightCycler 96等),不同型號在通量、檢測速度和功能上有所差異,用戶可根據(jù)實驗需求選擇。

七、技術(shù)優(yōu)勢與局限性

  • 優(yōu)勢

    • 閉管檢測減少污染風險。

    • 動態(tài)范圍廣,可檢測低至單拷貝的核酸。

  • 局限性

    • 依賴引物和探針的設(shè)計特異性。

    • 儀器和試劑成本較高。

八、總結(jié)

羅氏Roche實時熒光定量PCR儀作為分子生物學領(lǐng)域的常用工具,通過高靈敏的熒光檢測和自動化分析,為科研和臨床提供了可靠的核酸定量手段。其性能取決于正確的實驗設(shè)計、規(guī)范的操作流程以及合理的維護管理。在選擇和使用時,需結(jié)合具體實驗?zāi)繕撕蜅l件進行優(yōu)化。


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