賽默飛（Thermo Fisher Scientific）的熒光分光光度計是一種用于測量樣品熒光特性的儀器，常用于分析生物分子、藥物、環(huán)境樣品和其他化學物質(zhì)。以下是其常規(guī)操作流程：

一、準備工作

1. 儀器檢查與開機：

• 確保熒光分光光度計已經(jīng)正確連接電源和計算機。

• 打開儀器電源，等待儀器自檢和初始化完成。

• 打開相應的軟件（通常是Thermo Fisher的控制軟件）進行測量操作。

2. 準備樣品：

• 樣品的濃度和體積應根據(jù)實驗需求進行適當準備。

• 如果樣品需要稀釋，使用適當?shù)娜軇ㄈ缛ルx子水、緩沖液等）進行稀釋，確保樣品熒光強度在檢測范圍內(nèi)。

3. 清潔比色皿：

• 使用無塵擦紙擦拭比色皿，確保其表面無指紋或污漬。

• 根據(jù)需要，選擇合適的比色皿（通常為石英比色皿，適合紫外和可見光區(qū)的測量）。

• 用溶劑沖洗比色皿，避免樣品殘留。

4. 選擇合適的激發(fā)和發(fā)射波長：

• 根據(jù)實驗需要或文獻參考，確定熒光激發(fā)波長和發(fā)射波長。

• 在軟件中設置這些參數(shù)以進行測量。

二、操作步驟

1. 樣品與空白測量準備

• 空白樣品準備：

• 空白樣品通常是與測量樣品相同的溶劑或緩沖液，用于校準和消除背景干擾。

• 將空白樣品注入比色皿，放入熒光分光光度計的樣品槽。

• 測量空白：

• 在軟件中選擇“空白測量"功能，記錄空白的熒光信號。這一步是為了校正背景信號，確保后續(xù)測量的精確性。

• 測量完成后，取出比色皿，清潔并準備加入實驗樣品。

2. 樣品測量

• 加入樣品：

• 將已準備好的樣品注入清潔的比色皿，通常注入量為比色皿容積的2/3左右，避免過滿或過少。

• 將比色皿放入熒光分光光度計的樣品槽，確保放置穩(wěn)固。

• 設置測量參數(shù)：

• 在軟件中設定測量模式，如熒光光譜掃描、時間掃描或定量分析。

• 設置激發(fā)波長和發(fā)射波長，確保選擇適合的熒光探針或標記物的波長。

• 測量：

• 點擊“開始測量"按鈕，儀器將自動激發(fā)樣品并采集熒光發(fā)射數(shù)據(jù)。

• 數(shù)據(jù)會在軟件中實時顯示，包括熒光強度值及相應的光譜圖。

3. 數(shù)據(jù)分析

• 結(jié)果查看：

• 測量結(jié)束后，軟件界面會顯示熒光強度、峰值位置和其他相關數(shù)據(jù)。

• 如進行光譜掃描，用戶可以查看整個光譜的發(fā)射曲線，找到最大熒光峰值的位置。

• 數(shù)據(jù)保存與導出：

• 軟件通常允許保存測量結(jié)果和導出數(shù)據(jù)，便于后續(xù)分析或?qū)嶒炗涗洝?/p>

• 可將數(shù)據(jù)導出為Excel、PDF或圖形文件，以便進行進一步的分析或報告撰寫。

三、測量完成后的清理與關機

1. 清理比色皿：

• 使用適當?shù)娜軇┗蛉ルx子水清洗比色皿，避免樣品殘留污染下次測量。

• 使用無絨紙或空氣吹干比色皿，確保干燥后存放。

2. 清潔儀器樣品槽：

• 若不慎將樣品灑入樣品槽，用適當?shù)牟潦眉堓p輕清理儀器內(nèi)部，避免損壞光學系統(tǒng)。

3. 關機與儀器保養(yǎng)：

• 關閉軟件并保存所有數(shù)據(jù)。

• 關閉熒光分光光度計電源，斷開電源插頭以確保安全。

• 定期進行設備校準和維護，確保儀器的長期準確性和穩(wěn)定性。

四、常見問題及解決方法

1. 熒光信號過弱或無信號：

• 樣品濃度過低，考慮適當增加濃度或延長激發(fā)時間。

• 激發(fā)波長或發(fā)射波長選擇錯誤，確保選用合適的參數(shù)。

• 比色皿清潔不，檢查比色皿表面是否有污漬影響光路。

2. 熒光信號過強或超出范圍：

• 樣品濃度過高，建議稀釋樣品。

• 減少激發(fā)光強度或降低PMT（光電倍增管）增益以避免飽和。

3. 基線漂移或背景噪音高：

• 重新測量空白，確保空白溶劑中無熒光物質(zhì)干擾。

• 檢查儀器內(nèi)部光學系統(tǒng)是否清潔，清理樣品槽。

五、總結(jié)

賽默飛熒光分光光度計操作簡單、功能強大，是生物化學分析中的工具。通過合理的準備、設置與操作，科研人員可以獲得高質(zhì)量的熒光測量數(shù)據(jù)，為各類分子分析和研究提供堅實的基礎。